1 材料與方法

BSD-YF3600全溫培養(yǎng)搖床：上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；TGL-16M臺式高速冷凍離心機：金壇市良友 儀器有限公司；WD-9413A型凝膠成像分析系統(tǒng)、DYY-8C 電泳儀：北京市六一儀器廠；Smart Spec Plus核酸蛋白分 析儀：美國伯樂公司；GT9611梯度PCR儀：杭州艾普儀器 設(shè)備股份有限公司；GC-2014島津氣相色譜儀：日本島津 公司；YQX-T型厭氧培養(yǎng)箱：蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限 公司；Scientz-2C基因?qū)雰x：寧波新芝生物科技股份有 限公司。改良麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基：葡萄糖 1.0 g，KCl 1.8 g，酵母膏4 g， 醋酸鈉15 g，固體培養(yǎng)基加入瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL， pH自然，121 ℃滅菌30 min，使用前加入20 mL無水乙醇。

2 結(jié)果與分析

將合成的SigB表達盒經(jīng)HindIII/BamHIII雙酶切連接 至經(jīng)同樣雙酶切的pBE2R-sugar phosphatase-MCS整合型 穿梭質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染BL進行抗性篩選，隨機挑選10個陽性菌落 進行菌落PCR；挑7、8泳道陽性克隆培養(yǎng)5 mL 菌液，提取質(zhì)粒進行雙酶切鑒定。結(jié)果顯示，整合 組所有菌株己酸產(chǎn)量均極顯著高于對照組（P＜0.01），表明 抗性基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)實現(xiàn)了其功能；SigA1和SigA2之間，差異 顯著（P=0.024＜0.05），SigA1比SigA2顯著低；SigB1顯著低于 SigB2、SigB（3 P＜0.01），但SigB2與SigB3之間差異不顯著（P= 0.088＞0.05），SigB3高于SigB2。基于此，本研究選擇SigA2、 SigB3整合組菌株進行后續(xù)試驗。

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